Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
UDG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403189
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- UDG El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico UDG, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UDG Anticuerpo (B-7): sc-390255
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
UDG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403189 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen humano **UNG** codifica la **uracil-ADN glicosilasa (UDG)**, una enzima clave de la reparación por escisión de bases que inicia la eliminación del uracilo del ADN generado por la desaminación de citosina o por la incorporación errónea de dUMP durante la replicación. Al escindir el uracilo y crear un sitio abásico para su procesamiento posterior, UNG ayuda a preservar la estabilidad del genoma y limita la mutagénesis tanto en el genoma nuclear como en el mitocondrial. La actividad de UNG se integra con las respuestas al estrés replicativo, la señalización del daño en el ADN y las vías que contrarrestan lesiones impulsadas por desaminación, incluidos procesos relevantes para la diversificación de anticuerpos y la restricción innata del ADN retroviral. La desregulación de la reparación del uracilo y de los intermediarios de reparación asociados se ha vinculado con una mayor carga mutacional y fenotipos de inestabilidad genómica estudiados en biología del cáncer, inmunología e interacciones huésped–patógeno.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO UDG (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UNG en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UNG junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UNG tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UDG.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UNG para la investigación de la señalización de UDG, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de UNG críticos para la función de UDG
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UNG para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido UDG CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido UDG CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UNG. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UDG (h) y el plásmido HDR UDG (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UNG para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UNG definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.