Plásmido CRISPR de Activación (h) UCP3: sc-400866-ACT

La UCP3 humana (proteína desacoplante 3) es un transportador de la membrana interna mitocondrial que modula la fuga de protones e influye en la eficiencia del acoplamiento de la fosforilación oxidativa, moldeando la producción de ATP, el equilibrio de especies reactivas de oxígeno y la generación de calor en tejidos metabólicamente activos. Está estrechamente vinculada a la oxidación de ácidos grasos y al control de calidad mitocondrial, con funciones en la regulación del uso de sustratos durante el estrés por nutrientes y el alto flujo lipídico. La expresión alterada de UCP3 se ha asociado con resistencia a la insulina, disfunción metabólica ligada a la obesidad y fenotipos mitocondriales en músculo esquelético, lo que respalda su uso como un nodo para estudiar la homeostasis energética. Por tanto, UCP3 es relevante para vías que integran la respiración mitocondrial, el manejo de lípidos y la señalización redox en el metabolismo celular y del organismo.

UCP3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UCP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UCP3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UCP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UCP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UCP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UCP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UCP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UCP3 en células tumorales con expresión de UCP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.