Plasmide CRISPR d'Activation (h) UCH-L1: sc-401088-ACT

UCHL1 code l’hydrolase C‑terminale de l’ubiquitine L1 (UCH‑L1), une enzyme de désubiquitination enrichie dans les neurones, qui régule l’homéostasie de l’ubiquitine et la protéostase en traitant les précurseurs d’ubiquitine et en recyclant l’ubiquitine à partir de substrats conjugués. Par ses rôles dans le système ubiquitine–protéasome et le contrôle qualité des protéines, UCH‑L1 influence la fonction synaptique, l’intégrité axonale et les réponses cellulaires au stress protéotoxique. Des altérations de l’expression ou de l’activité de UCHL1 ont été associées à des processus neurodégénératifs, notamment à des voies liées à l’agrégation protéique et à la vulnérabilité neuronale, et ce gène est également étudié dans des contextes de biologie tumorale et de régulation des états cellulaires. Ces caractéristiques font de UCHL1 une cible utile pour étudier la signalisation dépendante de l’ubiquitine, la différenciation neuronale et les phénotypes de réponse au stress dans des systèmes modèles humains.

UCH-L1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UCHL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UCH-L1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UCHL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UCHL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UCH-L1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UCHL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UCH-L1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UCH-L1 dans les cellules tumorales présentant une expression de UCHL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.