Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ubiquitin (m): sc-423574

Présentation

Ubb code l’ubiquitine, un modificateur hautement conservé de 76 acides aminés qui est attaché de façon covalente aux protéines cibles afin de réguler leur stabilité, leur localisation et la signalisation. L’ubiquitination coordonne la dégradation dépendante du protéasome, l’endocytose et les réponses aux dommages de l’ADN, et elle interagit avec l’autophagie via des adaptateurs se liant à l’ubiquitine pour contrôler la protéostasie. Dans les cellules de souris, la signalisation dépendante de l’ubiquitine contribue largement à la progression du cycle cellulaire, aux réponses au stress et à la régulation des voies immunitaires, via la topologie des chaînes d’ubiquitine et la spécificité des ligases E3. Une homéostasie de l’ubiquitine et un flux protéasomal dérégulés sont couramment utilisés comme lectures mécanistiques dans des études sur la neurodégénérescence, l’inflammation et l’adaptation au stress liée au cancer, faisant d’Ubb un nœud clé pour l’exploration des voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ubiquitin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ubb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ubb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ubb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ubiquitin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ubb pour l'étude de la signalisation de Ubiquitin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ubb essentiels à la fonction de Ubiquitin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ubb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ubiquitin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ubiquitin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ubb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ubiquitin plasmide HDR (m) et le Ubiquitin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ubb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ubb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.