Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Ubiquitin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400526
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Ubiquitin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Ubiquitin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ubiquitin Anticuerpo (P4D1): sc-8017
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Ubiquitin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400526 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen humano **UBB** codifica la ubiquitina, una proteína de 76 aminoácidos altamente conservada que se une covalentemente a los sustratos para regular el destino de las proteínas y la señalización. La ubiquitinación controla la degradación proteasomal y la señalización no proteolítica mediante cadenas enlazadas por K48 y K63, modulando vías que incluyen el control de calidad proteica, las respuestas al daño del ADN, la progresión del ciclo celular, la endocitosis y la señalización inmunitaria innata. La homeostasis de la ubiquitina y la proteostasis dependiente de ubiquitina están estrechamente vinculadas a las respuestas celulares al estrés, y su desregulación se implica con frecuencia en la neurodegeneración, la biología del cáncer y fenotipos inflamatorios. Dado que **UBB** contribuye al reservorio celular de ubiquitina, las alteraciones en su expresión pueden influir en la disponibilidad global de ubiquitina y en la dinámica posterior del sistema ubiquitina–proteasoma.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ubiquitin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UBB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UBB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UBB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ubiquitin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UBB para la investigación de la señalización de Ubiquitin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de UBB críticos para la función de Ubiquitin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UBB para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UBB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ubiquitin (h) y el plásmido HDR Ubiquitin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UBB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UBB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.