UBE2O CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410610
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- UBE2O Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im UBE2O-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: UBE2O: sc-293246
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UBE2O CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-410610 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
UBE2O kodiert ein hybrides E2/E3-Ubiquitin-konjugierendes Enzym, das die Übertragung von Ubiquitin auf Substratproteine vermittelt und so Ubiquitinierung mit Proteostase und der Qualitätskontrolle von Proteinen verknüpft. Es ist an der Regulation translationsassoziierter Signalwege, am stressabhängigen Umbau von Proteinkomplexen und an Zellzustandsübergängen beteiligt, indem es ausgewählte Proteine für einen ubiquitinabhängigen Abbau markiert. Über seinen Einfluss auf die Ubiquitin-Signalgebung und die Stabilität zentraler Regulatoren wurde UBE2O in Zusammenhängen wie veränderter Proteom-Homöostase, metabolischer Anpassung sowie zellzyklus- oder differenzierungsassoziierten Programmen untersucht. Eine fehlregulierte UBE2O-Aktivität und veränderte Ubiquitinierungsdynamiken werden häufig bei Krebs und anderen Erkrankungen untersucht, die durch gestörten Proteinabbau und Stressantworten gekennzeichnet sind.
Das UBE2O CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UBE2O-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UBE2O-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UBE2O nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UBE2O-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UBE2O-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UBE2O-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf UBE2O-Exone abzielen, die für die UBE2O-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere UBE2O-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom UBE2O CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom UBE2O CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UBE2O-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UBE2O HDR-Plasmid (h) und UBE2O HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UBE2O-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UBE2O-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.