UBE2O Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410610

Descripción general

UBE2O codifica una enzima conjugadora de ubiquitina híbrida E2/E3 que media la transferencia de ubiquitina a proteínas sustrato, vinculando la ubiquitinación con la proteostasis y el control de calidad de las proteínas. Participa en la regulación de vías asociadas a la traducción, en la remodelación de complejos proteicos en respuesta al estrés y en transiciones del estado celular al dirigir determinadas proteínas hacia una degradación dependiente de ubiquitina. Por su influencia en la señalización por ubiquitina y en la estabilidad de reguladores clave, UBE2O se ha estudiado en contextos que incluyen alteraciones de la homeostasis del proteoma, adaptación metabólica y programas asociados al ciclo celular o a la diferenciación. La actividad desregulada de UBE2O y la dinámica de ubiquitinación se investigan con frecuencia en cáncer y otras enfermedades caracterizadas por degradación proteica alterada y respuestas al estrés perturbadas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBE2O (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UBE2O en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UBE2O junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UBE2O tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBE2O.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UBE2O para la investigación de la señalización de UBE2O, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de UBE2O críticos para la función de UBE2O
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UBE2O para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UBE2O CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido UBE2O CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UBE2O. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBE2O (h) y el plásmido HDR UBE2O (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UBE2O para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UBE2O definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.