Plásmido Doble Nickase (m) UBE2J1: sc-425050-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)UBE2J1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa UBE2J1 (m) y el plásmido de doble nickasa UBE2J1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ube2j1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UBE2J1 Anticuerpo (B-6): sc-377002
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) UBE2J1 | sc-425050-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **Ube2j1** codifica **UBE2J1**, una enzima E2 conjugadora de ubiquitina anclada a la membrana del retículo endoplásmico (RE) que colabora con ligasas E3 residentes en el RE para impulsar la degradación asociada al RE (ERAD) de proteínas mal plegadas o sobrantes. Al aportar ubiquitina a los sustratos retrotranslocados desde el retículo endoplásmico, UBE2J1 ayuda a mantener la proteostasis y respalda la señalización adaptativa durante el estrés del RE, incluido el diálogo cruzado con las vías de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR). La alteración de componentes de ERAD puede modificar la homeostasis de la vía secretora, la señalización inflamatoria y la sensibilidad al estrés proteotóxico, lo que convierte a UBE2J1 en un nodo relevante para estudiar mecanismos que contribuyen a la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la remodelación de la proteostasis asociada al cáncer. Su actividad también es pertinente en investigaciones sobre el control de calidad de proteínas de membrana y el procesamiento de antígenos vinculado al recambio dependiente de ubiquitina.
UBE2J1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ube2j1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ube2j1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ube2j1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ube2j1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.