Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2J1 (h): sc-405892

Présentation

UBE2J1 code une enzyme E2 de conjugaison de l’ubiquitine ancrée au réticulum endoplasmique (RE), qui coopère avec des ligases E3 pour ubiquitinyler des substrats mal repliés ou régulés en vue de leur dégradation par le protéasome. Elle intervient dans la dégradation associée au RE (ERAD), reliant le contrôle qualité des protéines à l’activité du système ubiquitine–protéasome et au maintien de l’homéostasie du RE lors de stress cellulaires. En modulant la protéostase, UBE2J1 influence des voies liées à la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), à la maturation des protéines sécrétées et au renouvellement des protéines associées à la membrane. Le dérèglement des composants de l’ERAD, dont UBE2J1, est pertinent pour la recherche sur des troubles caractérisés par un stress protéotoxique et une altération du renouvellement des protéines médié par l’ubiquitine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2J1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBE2J1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBE2J1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBE2J1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBE2J1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBE2J1 pour l'étude de la signalisation de UBE2J1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBE2J1 essentiels à la fonction de UBE2J1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBE2J1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBE2J1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UBE2J1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBE2J1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBE2J1 plasmide HDR (h) et le UBE2J1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBE2J1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBE2J1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.