UBE2E2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406437

Panoramica

UBE2E2 codifica un enzima E2 coniugante l’ubiquitina che trasferisce l’ubiquitina attivata dagli enzimi E1 alle ligasi E3, sostenendo l’ubiquitinazione dei substrati e la proteostasi. Attraverso il suo ruolo nel sistema ubiquitina–proteasoma, UBE2E2 influenza il turnover proteico, le risposte allo stress e la regolazione di nodi di segnalazione che dipendono da un’ubiquitinazione controllata. Una capacità di ubiquitinazione alterata può influenzare vie che governano la progressione del ciclo cellulare e le risposte al danno al DNA, collegando la disfunzione di UBE2E2 a fenotipi rilevanti per la segnalazione oncogenica e l’omeostasi cellulare. UBE2E2 è pertanto spesso studiato come modulatore della regolazione dipendente dall’ubiquitina e come componente di reti più ampie di controllo della qualità proteica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2E2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UBE2E2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UBE2E2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UBE2E2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBE2E2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UBE2E2 per lo studio della segnalazione di UBE2E2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UBE2E2 critici per la funzione di UBE2E2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UBE2E2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBE2E2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UBE2E2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UBE2E2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBE2E2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UBE2E2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UBE2E2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UBE2E2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.