Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2E2 (h): sc-406437

Présentation

UBE2E2 code une enzyme E2 de conjugaison de l’ubiquitine qui transfère l’ubiquitine activée des enzymes E1 vers les ligases E3, favorisant l’ubiquitination des substrats et la protéostasie. Par son rôle dans le système ubiquitine–protéasome, UBE2E2 influence le renouvellement des protéines, les réponses au stress et la régulation de nœuds de signalisation dépendant d’une ubiquitination finement contrôlée. Une capacité d’ubiquitination altérée peut affecter les voies qui régissent la progression du cycle cellulaire et les réponses aux dommages de l’ADN, reliant le dysfonctionnement de UBE2E2 à des phénotypes pertinents pour la signalisation oncogénique et l’homéostasie cellulaire. UBE2E2 est donc fréquemment étudiée comme modulateur de la régulation dépendante de l’ubiquitine et comme composant de réseaux plus larges de contrôle de la qualité des protéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2E2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBE2E2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBE2E2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBE2E2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBE2E2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBE2E2 pour l'étude de la signalisation de UBE2E2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBE2E2 essentiels à la fonction de UBE2E2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBE2E2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBE2E2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UBE2E2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBE2E2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBE2E2 plasmide HDR (h) et le UBE2E2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBE2E2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBE2E2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.