UBE2E1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423577

Descripción general

Ube2e1 codifica UBE2E1, una enzima E2 conjugadora de ubiquitina que coopera con ligasas E3 para transferir ubiquitina a proteínas sustrato, influyendo en la proteostasis y el recambio proteico. A través de su papel en la ubiquitinación, UBE2E1 contribuye a la regulación de la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización adaptativa al estrés al modular la estabilidad y la actividad de proteínas reguladoras clave. La alteración de la actividad de las enzimas E2 puede desorganizar el control de calidad dependiente de ubiquitina y las redes de señalización, procesos que con frecuencia se relacionan con la neurodegeneración, la inflamación y la transformación oncogénica. En modelos murinos, Ube2e1 constituye un nodo manejable para analizar la especificidad de la vía de ubiquitina y la redundancia entre miembros de la familia E2 en contextos relevantes para tejidos y enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBE2E1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ube2e1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ube2e1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ube2e1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBE2E1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ube2e1 para la investigación de la señalización de UBE2E1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ube2e1 críticos para la función de UBE2E1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ube2e1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UBE2E1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UBE2E1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ube2e1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBE2E1 (m) y el plásmido HDR UBE2E1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ube2e1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ube2e1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.