UBE2E1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423577

Panoramica

Ube2e1 codifica UBE2E1, un enzima E2 di coniugazione dell’ubiquitina che coopera con le ligasi E3 per trasferire l’ubiquitina sulle proteine substrato, contribuendo al mantenimento della proteostasi e al turnover proteico. Attraverso il suo ruolo nell’ubiquitinazione, UBE2E1 partecipa alla regolazione della progressione del ciclo cellulare, delle risposte al danno al DNA e della segnalazione adattativa allo stress, modulando la stabilità e l’attività di proteine regolatorie chiave. Alterazioni dell’attività degli enzimi E2 possono compromettere il controllo qualità e le reti di segnalazione dipendenti dall’ubiquitina, processi spesso implicati in neurodegenerazione, infiammazione e trasformazione oncogena. Nei modelli murini, Ube2e1 rappresenta un nodo sperimentalmente accessibile per analizzare la specificità delle vie dell’ubiquitina e la ridondanza tra i membri della famiglia E2 in contesti rilevanti per tessuto e malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2E1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ube2e1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ube2e1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ube2e1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBE2E1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ube2e1 per lo studio della segnalazione di UBE2E1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ube2e1 critici per la funzione di UBE2E1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ube2e1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBE2E1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UBE2E1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ube2e1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBE2E1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UBE2E1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ube2e1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ube2e1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.