Plásmido CRISPR de Activación (h) UBE2B: sc-404361-ACT

UBE2B (enzima conjugadora de ubiquitina E2 B) es una enzima humana E2 conjugadora de ubiquitina que se asocia con ligasas E3 para catalizar la transferencia de ubiquitina a sustratos proteicos, modulando la proteostasis mediante el sistema ubiquitina–proteasoma. Contribuye al recambio regulado de proteínas y al control de la señalización, con funciones establecidas en respuestas al daño del ADN y en procesos asociados a la cromatina, incluidos eventos de ubiquitinación que influyen en la elección de la vía de reparación. A través de estas actividades, UBE2B afecta la progresión del ciclo celular, la estabilidad del genoma y las redes de señalización frente al estrés. La ubiquitinación desregulada y la capacidad de reparación del ADN son relevantes de forma amplia para la oncogénesis y otros trastornos vinculados a la proteostasis y al mantenimiento del genoma alterados, lo que convierte a UBE2B en un nodo útil para estudios mecanísticos.

UBE2B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UBE2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UBE2B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UBE2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UBE2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UBE2B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UBE2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UBE2B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UBE2B en células tumorales con expresión de UBE2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.