Plásmido CRISPR de Activación (h) UBA2: sc-404495-ACT

UBA2 codifica la subunidad 2 de la enzima activadora de SUMO, que forma un heterodímero con SAE1 para constituir la enzima E1 que inicia la sumoilación al adenilar SUMO y transferirlo a la enzima conjugadora E2 UBC9. Esta vía regula la estabilidad proteica, la localización subcelular y la actividad en procesos clave como la señalización del daño en el ADN, la organización de la cromatina, el control transcripcional y la progresión del ciclo celular. La sumoilación dependiente de UBA2 influye en las respuestas al estrés y en la proteostasis mediante su coordinación con redes de modificación tipo ubiquitina. La desregulación de la actividad de la vía de SUMO, incluidas alteraciones en la función o en la expresión de UBA2, se ha implicado en programas transcripcionales oncogénicos y en defectos de mantenimiento del genoma relevantes para la biología del cáncer y otros fenotipos asociados a la proliferación o al estrés.

UBA2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UBA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UBA2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UBA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UBA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UBA2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UBA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UBA2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UBA2 en células tumorales con expresión de UBA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.