Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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U2AF65 Double Nickase Plasmid (m): sc-423572-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das U2AF65 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- U2AF65 Double-Nickase-Plasmid (m) und U2AF65 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf U2af2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: U2AF65: sc-53942
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
U2AF65 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423572-NIC | 20 µg | $410.00 |
U2af2 kodiert das Mausprotein U2AF65, einen essenziellen RNA-bindenden Spleißfaktor, der den Polypyrimidin-Trakt an 3′-Spleißstellen erkennt und während der frühen Assemblierung des Spleißosoms die Rekrutierung des U2-snRNP unterstützt. Über seine RNA-Erkennungsdomänen sowie Interaktionen mit U2AF35 und SF1 koordiniert U2AF65 die Exondefinition und Entscheidungen zur alternativen Spleißung, die die Zusammensetzung der Transkript-Isoformen in zahlreichen Signal- und Zellzykluswegen prägen. Störungen der U2AF65-abhängigen Spleißung können die mRNA-Reifung, den nukleären Export und die Zusammensetzung des Proteoms verändern, wodurch U2af2 ein zentraler Knotenpunkt für die Untersuchung der Genauigkeit der RNA-Prozessierung ist. Fehlregulierte Spleißprogramme und ein Ungleichgewicht von Spleißosom-Faktoren werden breit mit der Biologie hämatologischer und solider Tumoren sowie mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Krankheitsmechanismen in Verbindung gebracht, was den Einsatz von U2af2-Modellen zur Untersuchung krankheitsrelevanter Spleißnetzwerke stützt.
U2AF65 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des U2af2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von U2af2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die U2af2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit U2af2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.