Tyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400273

Übersicht

TH kodiert die Tyrosinhydroxylase, das geschwindigkeitsbestimmende Enzym der Catecholaminbiosynthese, das die Umwandlung von L‑Tyrosin zu L‑DOPA katalysiert, dem Vorläufer von Dopamin, Noradrenalin und Adrenalin. Ihre Aktivität integriert die Verfügbarkeit des Cofaktors Tetrahydrobiopterin (BH4), die eisenabhängige Katalyse und eine phosphorylierungsgetriebene Regulation, um die Neurotransmitterproduktion in dopaminergen und noradrenergen Neuronen sowie in chromaffinen Zellen des Nebennierenmarks zu steuern. Die Tyrosinhydroxylase ist zentral für neuronale Differenzierung, vesikuläre Beladung mit Neurotransmittern, synaptische Signalübertragung und zelluläre Stressantworten, die mit dem Redoxgleichgewicht und der mitochondrialen Funktion verknüpft sind. Eine Fehlregulation der TH-Expression oder -Aktivität wird im Zusammenhang mit Dopaminmangel, Defekten der catecholaminergen Signalübertragung und schaltkreisbezogenen Funktionsstörungen bei Neurodegeneration breit untersucht.

Das Tyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tyrosine Hydroxylase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tyrosine Hydroxylase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TH-Exone abzielen, die für die Tyrosine Hydroxylase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Tyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Tyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tyrosine Hydroxylase HDR-Plasmid (h) und Tyrosine Hydroxylase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.