Tyrosine Hydroxylase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400273

Visão geral

TH codifica a tirosina hidroxilase, a enzima limitante da velocidade na biossíntese de catecolaminas, que catalisa a conversão de L-tirosina em L-DOPA, o precursor da dopamina, noradrenalina e adrenalina. A sua atividade integra a disponibilidade do cofator tetrahidrobiopterina (BH4), a catálise dependente de ferro e a regulação mediada por fosforilação para controlar a produção de neurotransmissores em neurónios dopaminérgicos e noradrenérgicos, bem como em células cromafins da medula adrenal. A tirosina hidroxilase é central para a diferenciação neuronal, o carregamento vesicular de neurotransmissores, a sinalização sináptica e as respostas ao stress celular associadas ao equilíbrio redox e à função mitocondrial. A desregulação da expressão ou da atividade de TH é amplamente estudada no contexto de deficiência de dopamina, defeitos na sinalização catecolaminérgica e disfunção de circuitos associada à neurodegeneração.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Tyrosine Hydroxylase (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TH em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TH, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TH na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Tyrosine Hydroxylase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TH para a investigação da sinalização de Tyrosine Hydroxylase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TH críticos para a função Tyrosine Hydroxylase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TH para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Tyrosine Hydroxylase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Tyrosine Hydroxylase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TH. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Tyrosine Hydroxylase Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Tyrosine Hydroxylase (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TH para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TH definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.