Plasmide Double Nickase (m) Tyro3: sc-423567-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Tyro3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Tyro3 Double Nickase (m) et le plasmide Tyro3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Tyro3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Tyro3 Antibody (B-4): sc-166360
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Tyro3 | sc-423567-NIC | 20 µg | $410.00 |
Tyro3 code une tyrosine kinase réceptrice de la famille TAM, qui se lie aux ligands GAS6 et à la protéine S afin de réguler la survie cellulaire, la prolifération et l’élimination phagocytaire des cellules apoptotiques. Dans les tissus murins, la signalisation de TYRO3 active les voies PI3K–AKT et MAPK/ERK et s’articule avec des programmes d’homéostasie immunitaire qui limitent les signaux inflammatoires et soutiennent le remodelage tissulaire. Ce récepteur est impliqué dans le maintien neuronal et la fonction synaptique, ainsi que dans la régulation des cellules myéloïdes au sein du système immunitaire inné. Une activité dérégulée des récepteurs TAM, dont TYRO3, a été associée à une tolérance immunitaire altérée et a été étudiée dans des contextes d’inflammation chronique, d’auto-immunité et de réseaux de signalisation liés au cancer.
Tyro3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tyro3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tyro3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tyro3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tyro3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.