Plásmido Doble Nickase (h) Type I 4-phosphatase: sc-404750-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Type I 4-phosphatase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Type I 4-phosphatase (h) y el plásmido de doble nickasa Type I 4-phosphatase (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a INPP4A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Type I 4-phosphatase Anticuerpo (E-2): sc-390549
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Type I 4-phosphatase | sc-404750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Type I 4-phosphatase | sc-404750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INPP4A codifica la 4-fosfatasa de tipo I, una fosfatasa 4 de polifosfatos de inositol que hidroliza el fosfatidilinositol 3,4-bisfosfato a fosfatidilinositol 3-fosfato, remodelando los reservorios de fosfoinosítidos de membrana. A través de esta actividad, modula la dinámica de señalización dependiente de PI3K, influyendo en el reclutamiento de efectores con dominio PH, la identidad de las membranas endosomales y el control posterior de programas de crecimiento y supervivencia celular. La función de INPP4A se entrecruza con la señalización mediada por receptores y con procesos de tráfico vesicular que coordinan la detección de nutrientes y las respuestas al estrés. En la literatura, la regulación alterada de INPP4A y del recambio de PI(3,4)P2 se ha vinculado con redes de señalización desreguladas relevantes para la biología del cáncer y la neurobiología, lo que respalda estudios mecanísticos de reconfiguración de vías.
Type I 4-phosphatase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus INPP4A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de INPP4A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de INPP4A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con INPP4A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.