Plásmido Doble Nickase (m) Twinkle: sc-432601-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Twinkle consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Twinkle (m) y el plásmido de doble nickasa Twinkle (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Twnk. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Twinkle | sc-432601-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **Twnk** codifica Twinkle, una helicasa de ADN mitocondrial esencial para la replicación y el mantenimiento del ADNmt dentro de los nucleoides. Twinkle actúa junto con el replisoma mitocondrial para sostener la fosforilación oxidativa al preservar el número de copias y la integridad del genoma mitocondrial, influyendo así en el metabolismo energético celular y la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. La alteración de la actividad de **TWNK** se asocia con depleción de ADN mitocondrial y fenotipos de deleciones múltiples del ADNmt, lo que convierte a esta vía en un eje central para el estudio de la disfunción mitocondrial en la biología de enfermedades neuromusculares y neurodegenerativas. Por ello, **Twnk** se utiliza ampliamente como un nodo para investigar la estabilidad del genoma mitocondrial, las respuestas al estrés de replicación y los efectos posteriores sobre la biogénesis de la cadena respiratoria.
Twinkle El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Twnk en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Twnk. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Twnk. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Twnk alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.