Twinkle Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432601
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Twinkle El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Twinkle, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Twinkle Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-432601 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Twnk del ratón codifica la helicasa de ADN mitocondrial Twinkle, una enzima codificada en el núcleo que desenrolla el ADNmt durante la replicación y contribuye al mantenimiento del número de copias del genoma mitocondrial. Twinkle funciona dentro del replisoma mitocondrial junto con POLG y mtSSB para coordinar el avance de la horquilla de replicación, la dinámica del bucle D y la biogénesis mitocondrial global. La alteración de esta vía perturba la capacidad de fosforilación oxidativa, modifica la organización de los nucleoides mitocondriales y puede desencadenar respuestas compensatorias al estrés que reconfiguran el metabolismo celular. La disfunción de TWNK se asocia con depleción de ADNmt y múltiples fenotipos de trastornos mitocondriales, lo que convierte a Twnk en un locus clave para modelar la inestabilidad del genoma mitocondrial en la investigación biomédica.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Twinkle (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Twnk en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Twnk junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Twnk tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Twinkle.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Twnk para la investigación de la señalización de Twinkle, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Twnk críticos para la función de Twinkle
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Twnk para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Twinkle CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Twinkle CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Twnk. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Twinkle (m) y el plásmido HDR Twinkle (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Twnk para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Twnk definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.