Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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TWIK-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407263
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TWIK-2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TWIK-2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TWIK-2 Antibody (H-6): sc-376515
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TWIK-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-407263 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
KCNK6 codifica TWIK-2 (K2P6.1), un canale del potassio a due pori che contribuisce alla conduttanza di fondo (leak) del K+ e aiuta a determinare il potenziale di membrana a riposo e l’eccitabilità della membrana. L’attività di TWIK-2 influenza l’omeostasi ionica e la segnalazione calcio-dipendente modulando la polarizzazione cellulare, con ruoli riportati nella funzione della muscolatura liscia vascolare, nella biologia endoteliale e nell’attivazione delle cellule immunitarie. Grazie al suo impatto sulle proprietà elettriche e sulla segnalazione a valle, TWIK-2 è stato studiato in vie associate alla regolazione del tono vascolare e alle risposte infiammatorie. Una funzione dis-regolata dei canali K2P, incluso TWIK-2, è quindi rilevante per studi meccanicistici su ipertensione, disfunzione vascolare e fisiopatologia immuno-mediata.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TWIK-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNK6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNK6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNK6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TWIK-2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNK6 per lo studio della segnalazione di TWIK-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni KCNK6 critici per la funzione di TWIK-2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNK6 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TWIK-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TWIK-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNK6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TWIK-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TWIK-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNK6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNK6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.