Plásmido Doble Nickase (h) TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1: sc-400458-NIC

NKX2-1 codifica TTF-1 (factor de transcripción tiroideo 1), un factor de transcripción homeobox de unión al ADN que dirige la especificación de linaje y los programas de diferenciación en la tiroides, el pulmón y el prosencéfalo ventral. TTF-1 regula la identidad epitelial y la organogénesis coordinando redes transcripcionales que controlan la morfogénesis, las vías de biosíntesis hormonal en el tejido tiroideo y la expresión de genes del surfactante pulmonar en el epitelio de las vías aéreas y de los alvéolos. Mediante interacciones con cofactores y complejos reguladores de la cromatina, NKX2-1 integra señales del desarrollo para mantener estados de expresión génica específicos de cada tejido. La desregulación de NKX2-1 se asocia con trastornos congénitos del desarrollo y se estudia con frecuencia en biología del cáncer como un regulador asociado al linaje en tumores de tiroides y de pulmón.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NKX2-1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NKX2-1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NKX2-1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NKX2-1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.