TTC7A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412780

Descripción general

TTC7A codifica una proteína que contiene repeticiones tetratricopeptídicas, implicada en la organización de complejos multiproteicos que sostienen la polaridad epitelial y la homeostasis del citoesqueleto. Diversos estudios vinculan TTC7A con la señalización relacionada con fosfoinosítidos y con procesos de tráfico de membranas que influyen en la adhesión celular, la dinámica de la actina y la integridad del epitelio intestinal. Se han asociado variantes con pérdida de función a fenotipos intestinales e inmunitarios graves de inicio temprano, lo que convierte a TTC7A en un punto de entrada útil para analizar los mecanismos de disfunción de la barrera epitelial y la desregulación inmunitaria. En modelos celulares humanos, la perturbación de TTC7A puede ayudar a investigar la interacción entre vías (cross-talk) que conectan la organización de membranas, las respuestas al estrés y programas de diferenciación específicos de linaje.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TTC7A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TTC7A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TTC7A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TTC7A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TTC7A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TTC7A para la investigación de la señalización de TTC7A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TTC7A críticos para la función de TTC7A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TTC7A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TTC7A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TTC7A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TTC7A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TTC7A (h) y el plásmido HDR TTC7A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TTC7A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TTC7A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.