Plásmido CRISPR de Activación (m) TTC36: sc-431423-ACT

El gen murino **Ttc36** codifica **TTC36**, una proteína que contiene repeticiones tetratricopeptídicas (TPR) y que se predice que funciona como un andamiaje (scaffold) para complejos multiproteicos que coordinan interacciones proteína–proteína. Las proteínas con dominio TPR suelen influir en la proteostasis, el tráfico intracelular y la señalización al modular el reclutamiento de chaperonas y el ensamblaje de complejos reguladores. Aunque **TTC36** sigue estando caracterizada de manera incompleta, los estudios basados en expresión y en genética pueden aclarar su contribución a programas de control del estado celular, como la respuesta al estrés, la diferenciación y la homeostasis tisular. La desregulación de la formación de complejos mediada por TPR se asocia con frecuencia a fenotipos relacionados con enfermedades, lo que convierte a **Ttc36** en un objetivo útil para la exploración mecanística en modelos murinos.

TTC36 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ttc36 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TTC36 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ttc36 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ttc36, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TTC36. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ttc36 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TTC36 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TTC36 en células tumorales con expresión de Ttc36 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.