TSPAN1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404815-ACT

TSPAN1 (Tetraspanin 1) ist ein vierfach die Membran durchspannendes Transmembranprotein, das tetraspanin-angereicherte Mikrodomainen organisiert und die räumliche Verteilung von Partnerrezeptoren, Integrinen und Signalkomplexen an der Zelloberfläche moduliert. Über diese Assemblierungen kann TSPAN1 Zelladhäsion, Motilität, Membrantransport und proliferative Signalübertragung beeinflussen und wird damit mit Prozessen wie der epithelialen Organisation und der dynamischen Umgestaltung der Plasmamembran in Verbindung gebracht. Eine dysregulierte TSPAN1-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben und wird häufig im Zusammenhang mit Invasion, metastaseassoziierten Phänotypen und Veränderungen der Reaktionsfähigkeit auf Wachstumsfaktor-Signalwege untersucht. Seine Membranlokalisation und Scaffold-Funktion machen es zu einem geeigneten Knotenpunkt, um Rezeptor-Crosstalk und nachgeschaltete Umverdrahtungen von Signalwegen in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

TSPAN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TSPAN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TSPAN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TSPAN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TSPAN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TSPAN1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TSPAN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TSPAN1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TSPAN1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TSPAN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.