Plasmide CRISPR d'Activation (m) tsg 101: sc-423524-ACT

Tsg101 code pour le gène de susceptibilité tumorale 101, un composant central du complexe ESCRT-I qui coordonne le tri endosomal, la biogenèse des corps multivésiculaires et le trafic ubiquitine‑dépendant des protéines membranaires. Dans les cellules de souris, tsg101 soutient les voies de dégradation lysosomale, la régulation négative des récepteurs et les événements de remodelage membranaire liés à la cytocinèse et à l’autophagie. Par son rôle dans la scission membranaire médiée par ESCRT, Tsg101 influence la biogenèse des exosomes et le bourgeonnement viral, des processus fréquemment exploités dans des modèles d’infection et de signalisation intercellulaire. Un dysfonctionnement d’ESCRT et une expression altérée de Tsg101 ont été associés, dans des systèmes expérimentaux, à une prolifération cellulaire aberrante, à une instabilité génomique et à des phénotypes oncogéniques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie cellulaire liée au cancer.

tsg 101 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tsg101 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

tsg 101 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tsg101 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tsg101, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de tsg 101. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tsg101 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de tsg 101 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie tsg 101 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tsg101 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.