Trypsin-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423521

Descripción general

El gen Try4 de ratón codifica la tripsina-4, una proteasa serina secretada que escinde sustratos peptídicos después de residuos básicos y contribuye a la proteólisis extracelular. Al regular el recambio de proteínas en el espacio pericelular, Try4 puede influir en la señalización de los receptores activados por proteasas, en el procesamiento de péptidos bioactivos y en la remodelación de la matriz extracelular. La actividad proteasa de los miembros de la familia de las tripsinas se entrecruza con las cascadas inflamatorias y la dinámica de la barrera epitelial mediante la acción coordinada con otras proteasas serina e inhibidores endógenos. El equilibrio alterado entre proteasas e inhibidores se examina con frecuencia en modelos de lesión tisular, inflamación y remodelación del microambiente tumoral, lo que hace de Try4 un objetivo útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Trypsin-4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Try4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Try4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Try4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Trypsin-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Try4 para la investigación de la señalización de Trypsin-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Try4 críticos para la función de Trypsin-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Try4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Trypsin-4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Trypsin-4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Try4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Trypsin-4 (m) y el plásmido HDR Trypsin-4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Try4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Try4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.