Trypsin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423520

Übersicht

Prss3 kodiert Trypsin-3, eine sekretierte Serinprotease, die proteolytische Spaltungen nach Lysin- oder Argininresten katalysiert und zum extrazellulären Proteinumsatz beiträgt. In Mausgeweben kann die Trypsin-3-Aktivität das perizelluläre Remodeling beeinflussen, indem sie Komponenten der Signalübertragung über proteaseaktivierte Rezeptoren (PAR) prozessiert und mit endogenen Inhibitoren wie Serinprotease-Inhibitoren interagiert, wodurch entzündliche sowie barrierebezogene Antworten geprägt werden. Eine fehlregulierte Proteolyse der Trypsin-Familie wurde mit abweichender Epithel-Dynamik, pankreatitisassoziierten Signalwegen und dem Remodeling des tumorassoziierten Mikromilieus durch Veränderungen in Zelladhäsion und Matrixverarbeitung in Verbindung gebracht. Daher wird Prss3 hinsichtlich seiner Rollen in Protease-Netzwerken untersucht, die Sekretion, Gewebehomöostase und proteasegetriebene Signalkaskaden regulieren.

Das Trypsin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Prss3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Prss3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Prss3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Trypsin-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Prss3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Trypsin-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Prss3-Exone abzielen, die für die Trypsin-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Prss3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Trypsin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Trypsin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Prss3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Trypsin-3 HDR-Plasmid (m) und Trypsin-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Prss3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Prss3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.