Trypsin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401128
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Trypsin-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Trypsin-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Trypsin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401128 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PRSS1 codifica la tripsina-1, una proteasa serina secretada que se sintetiza como tripsinógeno y se activa en el tracto gastrointestinal para escindir sustratos peptídicos e iniciar cascadas proteolíticas. Su actividad contribuye a la activación de enzimas digestivas y puede modular la proteólisis extracelular, con efectos posteriores sobre la función de barrera epitelial y la señalización inflamatoria. La activación desregulada de la tripsina-1 y las variantes de PRSS1 se asocian con la biología de la pancreatitis, incluida la activación prematura de zimógenos, las respuestas de estrés de las células acinares y los mecanismos de lesión tisular. Por lo tanto, PRSS1 es un punto de partida útil para estudiar vías impulsadas por proteasas y relaciones genotipo-fenotipo en modelos de investigación pancreática y gastrointestinal.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Trypsin-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PRSS1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PRSS1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PRSS1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Trypsin-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PRSS1 para la investigación de la señalización de Trypsin-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PRSS1 críticos para la función de Trypsin-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PRSS1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Trypsin-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Trypsin-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PRSS1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Trypsin-1 (h) y el plásmido HDR Trypsin-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PRSS1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PRSS1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.