TRPV6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402632-ACT

TRPV6 codifica um canal epitelial altamente seletivo para Ca²⁺ da família TRP vaniloide, que medeia a entrada de cálcio através da membrana plasmática. Ao regular a sinalização citosólica de Ca²⁺, o TRPV6 influencia programas transcricionais dependentes de cálcio, o transporte epitelial e a diferenciação celular. A atividade do TRPV6 se integra a vias a jusante do influxo de cálcio, incluindo a sinalização dependente de calmodulina e redes mais amplas de homeostase iônica. A expressão desregulada de TRPV6 e alterações no manejo de cálcio têm sido associadas à fisiopatologia epitelial e a fenótipos relacionados ao câncer, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de proliferação, invasão e sinalização regulada por hormônios.

TRPV6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRPV6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRPV6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRPV6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRPV6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRPV6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRPV6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRPV6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRPV6 em células tumorais com expressão de TRPV6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.