TRPV3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417690-ACT

TRPV3 codifica um canal catiônico não seletivo sensível ao calor e a estímulos químicos, da família dos receptores de potencial transitório vaniloide (TRP), que regula o influxo de Ca2+ em contextos epiteliais e sensoriais. A ativação do canal influencia a excitabilidade da membrana e vias de sinalização a jusante dependentes de Ca2+, implicadas na diferenciação de queratinócitos, na homeostase da barreira e na comunicação neuroepitelial. A atividade do TRPV3 se cruza com redes de sinalização inflamatória e pruriceptiva por meio da modulação da dinâmica do cálcio intracelular e de cascatas de segundos mensageiros. Alterações na expressão ou na função de TRPV3 têm sido associadas a fenótipos de disfunção da barreira cutânea e à biologia relacionada ao prurido crônico, sustentando seu uso como alvo mecanístico em pesquisas de vias epidérmicas e sensoriais.

TRPV3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRPV3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRPV3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRPV3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRPV3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRPV3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRPV3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRPV3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRPV3 em células tumorais com expressão de TRPV3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.