Particules Lentivirales d'Activation (h) TRPM8: sc-401744-LAC

TRPM8 (transient receptor potential cation channel subfamily M member 8) code un canal ionique perméable au Ca2+, sensible au froid et au menthol, qui joue un rôle majeur de détecteur du refroidissement environnemental et d’agonistes chimiques dans les neurones sensoriels et d’autres types cellulaires. L’activité de TRPM8 régule l’excitabilité membranaire et la signalisation calcique intracellulaire, influençant des processus en aval tels que les voies de signalisation des kinases, les réponses transcriptionnelles et les voies d’inflammation neurogène. Au-delà de ses fonctions dans la somatosensation, TRPM8 a été associé à la physiologie épithéliale et neuronale et fait l’objet de nombreuses études dans le contexte de la signalisation de la douleur, des mécanismes de neuropathie périphérique et des altérations de l’homéostasie du calcium. Une expression ou une activité du canal TRPM8 dérégulée a été rapportée dans plusieurs contextes pertinents sur le plan pathologique, ce qui en fait un point d’entrée moléculaire utile pour des études mécanistiques de la transduction sensorielle et des réseaux de signalisation dépendants du Ca2+.

Les particules d'activation lentivirales TRPM8 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TRPM8 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TRPM8 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TRPM8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TRPM8. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TRPM8 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.