TRPM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403223

Übersicht

TRPM5 (transient receptor potential cation channel subfamily M member 5) ist ein durch Ca2+ aktivierter, monovalenter Kationenkanal, der als Antwort auf intrazelluläre Calciumsignale die Plasmamembran depolarisiert. Er wirkt nachgeschaltet der Phospholipase‑C‑Signalgebung und der IP3‑vermittelten Ca2+-Freisetzung und prägt stimulusinduzierte elektrische Aktivität sowie Signalverstärkung in chemosensorischen und sekretorischen Zelltypen. Die TRPM5‑Aktivität ist mit GPCR‑getriebenen Signalwegen verknüpft, die an der Geschmackswahrnehmung und anderen calciumabhängigen zellulären Antworten beteiligt sind, und beeinflusst die Erregbarkeit sowie nachgeschaltete Transkriptionsprogramme. Eine fehlregulierte TRPM5‑Expression oder ‑Funktion wurde mit veränderter sensorischer Signalübertragung in Verbindung gebracht und im Kontext von Krebszellverhalten und metabolischen Signalphänotypen untersucht.

Das TRPM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRPM5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRPM5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRPM5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRPM5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRPM5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRPM5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRPM5-Exone abzielen, die für die TRPM5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRPM5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRPM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TRPM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRPM5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRPM5 HDR-Plasmid (h) und TRPM5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRPM5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRPM5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.