Plásmido Doble Nickase (m) TRPC6: sc-423517-NIC

Trpc6 codifica TRPC6, un canal catiónico no selectivo sensible al diacilglicerol, que media la entrada de Ca²⁺ operada por receptores y modula la dinámica del calcio intracelular en múltiples tipos celulares de ratón. TRPC6 integra la señalización aguas abajo de los GPCR y de los receptores tirosina cinasa mediante vías dependientes de PLC, influyendo en la señalización de calcineurina/NFAT, la remodelación del citoesqueleto y las respuestas mecanosensibles. En el riñón, la actividad de TRPC6 está estrechamente vinculada a la función de los podocitos y a la señalización del diafragma de hendidura, y la actividad alterada del canal se ha asociado con fenotipos de lesión glomerular en modelos experimentales. TRPC6 también se estudia en el músculo liso vascular y en contextos inmunitarios, donde la entrada de Ca²⁺ modula la contractilidad, la migración y programas transcripcionales relevantes para la inflamación y la remodelación.

TRPC6 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Trpc6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Trpc6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Trpc6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Trpc6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.