TRPC6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401205

Descripción general

TRPC6 codifica un canal catiónico no selectivo de la familia de canales TRP canónicos (transient receptor potential canonical) que media la entrada de Ca²⁺ dependiente de receptores en la membrana plasmática. La actividad del canal suele estar acoplada a la señalización impulsada por PLC aguas abajo de GPCR y de receptores tirosina quinasa, modulando la dinámica citosólica de Ca²⁺ que regula respuestas transcripcionales, la remodelación del citoesqueleto y la motilidad celular. En tejidos humanos, TRPC6 contribuye a la entrada de calcio mecanosensible y sensible al diacilglicerol, con activación posterior de vías como calcineurina–NFAT y la señalización MAPK. La disfunción de TRPC6 se ha implicado en la biología de los podocitos renales y en mecanismos de enfermedad glomerular, así como en procesos cardiovasculares y neuroinflamatorios, lo que respalda su utilidad como diana para el análisis de vías en modelos celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRPC6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TRPC6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TRPC6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TRPC6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRPC6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TRPC6 para la investigación de la señalización de TRPC6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TRPC6 críticos para la función de TRPC6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TRPC6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRPC6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TRPC6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TRPC6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRPC6 (h) y el plásmido HDR TRPC6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TRPC6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TRPC6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.