Plásmido CRISPR de Activación (h) TRPC6: sc-401205-ACT

El TRPC6 humano codifica un canal catiónico no selectivo de potencial receptor transitorio, permeable a Ca2+, que se activa aguas abajo de la señalización de la fosfolipasa C y del diacilglicerol. La entrada de Ca2+ mediada por TRPC6 sostiene la entrada de calcio operada por receptor, modelando la dinámica intracelular del calcio que regula la remodelación del citoesqueleto, la contractilidad y programas de transcripción génica como la señalización dependiente de NFAT. El canal está implicado en vías mecanosensibles y asociadas a GPCR en podocitos renales y en el músculo liso vascular, y la actividad alterada de TRPC6 se asocia con fenotipos de enfermedad renal proteinúrica y remodelado cardiovascular. TRPC6 también se estudia en contextos de proliferación y migración dependientes de calcio, lo que lo hace relevante para diversos flujos de trabajo de investigación en señalización celular y canales iónicos.

TRPC6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRPC6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRPC6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRPC6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRPC6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRPC6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRPC6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRPC6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRPC6 en células tumorales con expresión de TRPC6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.