Plásmido Doble Nickase (h) TRPC5: sc-403745-NIC

TRPC5 (miembro 5 de la subfamilia C de canales catiónicos TRP, “transient receptor potential”) codifica un canal catiónico no selectivo permeable al Ca2+ que funciona como sensor de señales extracelulares e intracelulares para regular la excitabilidad de la membrana y la señalización dependiente de calcio. En células humanas, TRPC5 contribuye a la entrada de calcio operada por receptores aguas abajo de vías de GPCR y de receptores tirosina quinasa, en intersección con la señalización de PLC, el metabolismo de fosfoinosítidos y programas transcripcionales posteriores como NFAT y MAPK. La actividad de TRPC5 influye en la dinámica del citoesqueleto, la migración celular y la función de barrera a través de efectores dependientes de Ca2+, vinculando la activación del canal con respuestas mecanicoquímicas. La desregulación de la señalización de TRPC5 se ha asociado con contextos relevantes para la neurobiología, la fisiología renal y cardiovascular, y las respuestas al estrés celular, lo que lo convierte en un objetivo útil para el análisis de vías en modelos relevantes para enfermedades.

TRPC5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TRPC5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TRPC5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TRPC5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TRPC5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.