TRPC4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423515

Descripción general

Trpc4 codifica TRPC4, un canal catiónico no selectivo de la familia TRP canónica que media la entrada de Ca²⁺ operada por receptores y por vaciamiento de depósitos (store-operated) aguas abajo de la señalización por GPCR y PLC. El influjo de Ca²⁺ dependiente de TRPC4 contribuye a la despolarización de la membrana y a programas de transcripción dependientes de calcio, influyendo en procesos como la regulación de la barrera endotelial, la contractilidad del músculo liso y la excitabilidad neuronal. En sistemas murinos, la actividad de TRPC4 se estudia con frecuencia en vías que controlan el tono y la permeabilidad vascular, la motilidad del tracto gastrointestinal y urinario, y la señalización sináptica. La desregulación de la homeostasis de calcio vinculada a TRPC4 se ha asociado con fenotipos relevantes para la investigación cardiovascular, inflamatoria y neuroconductual, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de señalización y fisiología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRPC4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trpc4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trpc4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trpc4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRPC4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trpc4 para la investigación de la señalización de TRPC4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Trpc4 críticos para la función de TRPC4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trpc4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRPC4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TRPC4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trpc4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRPC4 (m) y el plásmido HDR TRPC4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trpc4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trpc4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.