TRPC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423513

Übersicht

Trpc2 kodiert TRPC2, ein Mitglied der Familie der transient receptor potential canonical (TRPC)-Kationenkanäle, das den rezeptorvermittelten Ca2+-Einstrom nachgeschaltet zur Phospholipase‑C-Signalübertragung reguliert. In der Maus ist TRPC2 besonders eng mit der sensorischen Signaltransduktion im vomeronasalen System verknüpft, wo der Calciumeinstrom die neuronale Erregbarkeit sowie nachgelagerte MAPK-/CaM-abhängige Signalwege formt, die Programme der Immediate-Early-Gene beeinflussen. Über diese calciumabhängigen Prozesse trägt Trpc2 zu pheromoninduzierten Verhaltensweisen und zur neuroendokrinen Kopplung bei und ist damit relevant für Studien zur Chemosensation, zur Funktion neuronaler Schaltkreise und zu verhaltensassoziierten Phänotypen. Eine Störung von Trpc2 wird häufig genutzt, um zu untersuchen, wie TRP-kanalvermittelte Calciumdynamik die sensorische Verarbeitung und organismische Reaktionen koordiniert.

Das TRPC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trpc2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trpc2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trpc2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRPC2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trpc2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRPC2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trpc2-Exone abzielen, die für die TRPC2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trpc2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRPC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TRPC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trpc2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRPC2 HDR-Plasmid (m) und TRPC2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trpc2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trpc2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.