Troponin T-FS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423462

Übersicht

Tnnt3 kodiert das schnelle skelettmuskelspezifische Troponin T (Troponin T-FS), eine zentrale Komponente des Troponin-Komplexes der dünnen Filamente, der die Bindung von zytosolischem Ca²⁺ mit der Bewegung von Tropomyosin und dem Querbrückenzyklus zwischen Aktin und Myosin koppelt. Indem Troponin T-FS den Troponin-Komplex an Tropomyosin verankert, trägt es dazu bei, die Kontraktionskinetik sowie die fasertyp-spezifische kontraktile Leistungsfähigkeit während der Erregungs-Kontraktions-Kopplung festzulegen. Die Regulation von Tnnt3 steht im Schnittpunkt von Myofibrillogenese, Sarcomer-Erhalt und calciumabhängiger Signalgebung, die die Muskelanpassung an Aktivität und Belastung feinabstimmt. Eine Fehlregulation oder veränderte Isoformnutzung von schnellem Troponin T ist für Studien zu Skelettmuskelschwäche, myofibrillärer Desorganisation und damit verbundenen Mechanismen neuromuskulärer Erkrankungen relevant.

Das Troponin T-FS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnnt3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnnt3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnnt3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Troponin T-FS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnnt3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Troponin T-FS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnnt3-Exone abzielen, die für die Troponin T-FS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnnt3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Troponin T-FS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Troponin T-FS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnnt3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Troponin T-FS HDR-Plasmid (m) und Troponin T-FS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnnt3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnnt3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.