Troponin T-FS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423462

Descripción general

Tnnt3 codifica la troponina T del músculo esquelético rápido (Troponina T-FS), un componente central del complejo de troponina del filamento delgado que acopla la unión de Ca²⁺ citosólico al movimiento de la tropomiosina y al ciclo de puentes cruzados actina–miosina. Al anclar el complejo de troponina a la tropomiosina, la Troponina T-FS contribuye a determinar la cinética de la contracción y el rendimiento contráctil específico del tipo de fibra durante el acoplamiento excitación–contracción. La regulación de Tnnt3 se entrecruza con la miofibrilogénesis, el mantenimiento del sarcómero y la señalización dependiente de calcio que ajusta la adaptación muscular a la actividad y la carga. La desregulación o el uso alterado de isoformas de la troponina T rápida es relevante en estudios sobre debilidad del músculo esquelético, desorganización miofibrilar y mecanismos relacionados de enfermedades neuromusculares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Troponin T-FS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnnt3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnnt3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnnt3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Troponin T-FS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnnt3 para la investigación de la señalización de Troponin T-FS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnnt3 críticos para la función de Troponin T-FS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnnt3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Troponin T-FS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Troponin T-FS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnnt3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Troponin T-FS (m) y el plásmido HDR Troponin T-FS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnnt3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnnt3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.