Troponin T-FS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402885-ACT

TNNT3 codifica a troponina T do músculo esquelético de contração rápida (Troponina T-FS), um componente central do complexo de troponina que ancora a tropomiosina no filamento fino e acopla a ligação de Ca²⁺ ao ciclo regulado de pontes cruzadas actina–miosina. Ao integrar a sinalização de cálcio com a mecânica do sarcómero, a Troponina T-FS ajuda a determinar a cinética de contração, a geração de força e as propriedades contráteis específicas do tipo de fibra. A atividade de TNNT3 interseta-se com vias de acoplamento excitação–contração e de montagem miofibrilar que moldam o desempenho muscular e a integridade estrutural. A desregulação ou variação em componentes de troponina de contração rápida tem sido associada a alterações da contratilidade e a fenótipos miopáticos, tornando TNNT3 um nó útil para estudar a biologia do músculo esquelético e a remodelação contrátil relevante para doenças.

Troponin T-FS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNNT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Troponin T-FS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNNT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNNT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Troponin T-FS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNNT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Troponin T-FS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Troponin T-FS em células tumorais com expressão de TNNT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.