Troponin T-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400949

Übersicht

TNNT2 kodiert das kardiale Troponin T, einen zentralen Bestandteil des Troponin-Komplexes, der die Ca²⁺-Signalgebung mit der Regulation der Aktin-Myosin-Interaktion am dünnen Filament in quergestreifter Muskulatur koppelt. Indem TNNT2 den Troponin-Komplex an Tropomyosin verankert, trägt es zur Koordination der Kontraktionsdynamik des Sarkomers, der myofibrillären Organisation und der Erregungs-Kontraktions-Kopplung in Kardiomyozyten bei. Genetische Varianten oder eine fehlregulierte Expression von TNNT2 stehen mit erblichen Kardiomyopathien und Kontraktionsstörungen in Zusammenhang und machen es zu einem wichtigen molekularen Ansatzpunkt für die Untersuchung der Sarkomerbiologie, von Calcium-Handling-Netzwerken und Stressantwort-Signalwegen in menschlichen Herzmuskelzellen. TNNT2 wird daher häufig als funktioneller Knotenpunkt genutzt, um krankheitsassoziiertes Remodeling zu modellieren, die Sensitivität der Myofilamente zu beurteilen und die Reifung von Kardiomyozyten in vitro zu benchmarken.

Das Troponin T-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TNNT2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TNNT2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TNNT2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Troponin T-C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TNNT2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Troponin T-C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TNNT2-Exone abzielen, die für die Troponin T-C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TNNT2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Troponin T-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Troponin T-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TNNT2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Troponin T-C HDR-Plasmid (h) und Troponin T-C HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TNNT2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TNNT2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.