Troponin T-C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400949

Visão geral

TNNT2 codifica a troponina T cardíaca, um componente central do complexo de troponina que acopla a sinalização por Ca²⁺ à regulação do filamento fino da interação actina–miosina no músculo estriado. Ao ancorar o complexo de troponina à tropomiosina, o TNNT2 ajuda a coordenar a dinâmica de contração do sarcómero, a organização miofibrilar e o acoplamento excitação–contração nos cardiomiócitos. Variações genéticas ou a expressão desregulada de TNNT2 estão associadas a cardiomiopatias hereditárias e disfunção contrátil, tornando-o um ponto de entrada molecular essencial para estudar a biologia sarcomérica, as redes de manuseio de cálcio e as vias de resposta ao stress em células cardíacas humanas. Por isso, o TNNT2 é amplamente utilizado como um nó funcional para modelar remodelação associada a doença, avaliar a sensibilidade dos miofilamentos e servir de referência para a maturação de cardiomiócitos in vitro.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Troponin T-C (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TNNT2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TNNT2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TNNT2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Troponin T-C.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TNNT2 para a investigação da sinalização de Troponin T-C, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TNNT2 críticos para a função Troponin T-C
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TNNT2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Troponin T-C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Troponin T-C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TNNT2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Troponin T-C Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Troponin T-C (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TNNT2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TNNT2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.