Plásmido CRISPR de Activación (h) Troponin T-C: sc-400949-ACT

TNNT2 codifica la troponina T cardíaca, un componente central del complejo de troponina que ancla las subunidades reguladoras al filamento delgado y convierte las señales de Ca²⁺ en interacciones coordinadas entre actina y miosina. Al modular la posición de la tropomiosina sobre la F-actina, TNNT2 ayuda a determinar la cinética y la sensibilidad de la contracción y la relajación del sarcómero, integrándose con el acoplamiento excitación–contracción y las vías de manejo del calcio. Las alteraciones en la expresión o la función de TNNT2 perturban la organización miofibrilar y el rendimiento contráctil, y TNNT2 se asocia ampliamente con fenotipos de miocardiopatía tanto hereditaria como adquirida. Como marcador del linaje cardíaco y nodo funcional en la señalización sarcomérica, TNNT2 se utiliza con frecuencia para estudiar la maduración de los miocitos, las respuestas al estrés y los programas transcripcionales relacionados con la contractilidad.

Troponin T-C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TNNT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Troponin T-C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TNNT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TNNT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Troponin T-C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TNNT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Troponin T-C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Troponin T-C en células tumorales con expresión de TNNT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.