Troponin I-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423459

Übersicht

Tnni3 kodiert die kardiale Troponin‑I‑Isoform, die zusammen mit Troponin T und Troponin C auf dem dünnen Filament einen regulatorischen Komplex bildet und während der Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung die Aktin‑Myosin‑Interaktion steuert. Durch die Ca²⁺‑abhängige Modulation der Myosin‑ATPase‑Aktivität hilft Troponin I, Kontraktilität und Relaxation des Sarkomers fein abzustimmen, und integriert dabei Signalinputs wie die durch Kinasen vermittelte Phosphorylierung, welche die Ca²⁺‑Empfindlichkeit der Myofilamente verändert. In Maus‑Kardiomyozyten ist Tnni3 zentral für die Organisation des Sarkomers und für Prozesse der Calciumhandhabung, die dem Herzzeitvolumen zugrunde liegen. Veränderte Troponin‑I‑Funktion oder ‑Regulation wird häufig im Zusammenhang mit Mechanismen der Kardiomyopathie, kontraktiler Dysfunktion und stressinduzierten Remodeling‑Phänotypen untersucht.

Das Troponin I-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnni3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnni3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnni3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Troponin I-C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnni3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Troponin I-C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnni3-Exone abzielen, die für die Troponin I-C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnni3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Troponin I-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Troponin I-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnni3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Troponin I-C HDR-Plasmid (m) und Troponin I-C HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnni3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnni3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.