Troponin I-C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423459

Visão geral

Tnni3 codifica a isoforma cardíaca da troponina I, que forma um complexo regulador com a troponina T e a troponina C no filamento fino para controlar a interação actina–miosina durante o acoplamento excitação–contração. Por meio da modulação, dependente de Ca²⁺, da atividade ATPase da miosina, a troponina I ajuda a ajustar a contratilidade e o relaxamento do sarcômero, integrando sinais como a fosforilação mediada por quinases, que altera a sensibilidade do miofilamento ao Ca²⁺. Em cardiomiócitos de camundongo, Tnni3 é central para a organização do sarcômero e para processos de manuseio de cálcio que sustentam o débito cardíaco. Alterações na função ou na regulação da troponina I são comumente estudadas no contexto de mecanismos de cardiomiopatia, disfunção contrátil e fenótipos de remodelamento induzido por estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Troponin I-C (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tnni3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tnni3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tnni3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Troponin I-C.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tnni3 para a investigação da sinalização de Troponin I-C, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tnni3 críticos para a função Troponin I-C
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tnni3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Troponin I-C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Troponin I-C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tnni3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Troponin I-C Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Troponin I-C (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tnni3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tnni3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.