Troponin C slow skeletal Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423431

Descripción general

Tnnc1 codifica la troponina C lenta del músculo esquelético, una subunidad reguladora del complejo de troponina que se une a Ca2+ y que acopla los transitorios de calcio citosólico al ciclo de formación y ruptura de puentes cruzados actina–miosina en el músculo estriado. Al experimentar cambios conformacionales dependientes de Ca2+, TNNC1 modula la posición de la tropomiosina sobre los filamentos delgados y ajusta la cinética de contracción, la relajación y la eficiencia energética en las fibras de contracción lenta y en el corazón. Esta función de detección de calcio se integra con las vías de acoplamiento excitación–contracción y de organización del sarcómero, conectando el manejo intracelular de Ca2+ con la capacidad de respuesta de los miofilamentos. La desregulación de TNNC1 y de la sensibilidad al Ca2+ de los filamentos delgados se ha implicado en cardiomiopatías hereditarias y en disfunción contráctil, lo que respalda su uso en estudios de biología sarcomérica y de mecanismos de enfermedad muscular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Troponin C slow skeletal (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnnc1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnnc1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnnc1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Troponin C slow skeletal.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnnc1 para la investigación de la señalización de Troponin C slow skeletal, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnnc1 críticos para la función de Troponin C slow skeletal
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnnc1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Troponin C slow skeletal CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Troponin C slow skeletal CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnnc1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Troponin C slow skeletal (m) y el plásmido HDR Troponin C slow skeletal (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnnc1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnnc1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.