Plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin C fast skeletal (m): sc-423432

Présentation

Tnnc2 code la troponine C squelettique rapide, une sous-unité régulatrice du complexe de la troponine se liant au Ca2+, qui contrôle l’activation des filaments fins et le cycle des ponts actine-myosine dans le muscle squelettique à contraction rapide. En détectant les transitoires cytosoliques de Ca2+, la TNNC2 coordonne le déplacement de la tropomyosine sur l’actine afin de moduler l’activité ATPase de l’actomyosine et la force contractile lors du couplage excitation–contraction. Cette protéine s’intègre aux voies de gestion du calcium et d’organisation du sarcomère, reliant la dynamique de la signalisation intracellulaire à la production mécanique dans les fibres musculaires. Des altérations de la fonction du complexe de la troponine et de la sensibilité au Ca2+ sont pertinentes pour l’étude des performances du muscle squelettique, de la physiologie des types de fibres et des mécanismes contribuant aux phénotypes de faiblesse musculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin C fast skeletal (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnnc2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnnc2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnnc2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Troponin C fast skeletal.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnnc2 pour l'étude de la signalisation de Troponin C fast skeletal, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnnc2 essentiels à la fonction de Troponin C fast skeletal
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnnc2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Troponin C fast skeletal plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Troponin C fast skeletal plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnnc2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Troponin C fast skeletal plasmide HDR (m) et le Troponin C fast skeletal (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnnc2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnnc2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.