Partículas Lentivirales de Activación (m2) Tropomyosin γ: sc-425595-LAC-2

El gen murino Tpm3 codifica la tropomiosina γ, una proteína de tipo coiled-coil que se une a la actina y se polimeriza a lo largo de la actina filamentosa para regular la estabilidad de los filamentos delgados, el acceso de la miosina y la generación de fuerza en estructuras citoesqueléticas y contráctiles. Al definir la identidad y la dinámica de los filamentos de actina, TPM3 contribuye a procesos como el control de la forma celular, la adhesión, la migración y la mecanotransducción, influyendo en la remodelación actomiosínica en células musculares y no musculares. La función o expresión desregulada de TPM3 se ha asociado con defectos del citoesqueleto y miopatías, y los eventos de fusión de TPM3 están implicados en contextos de señalización oncogénica que alteran el comportamiento dependiente de la actina. La perturbación genética de Tpm3 en modelos murinos respalda estudios mecanísticos de la regulación actina–miosina, el ensamblaje del sarcómero y las interacciones entre vías citoesqueléticas mediante edición basada en CRISPR y fenotipado funcional.

Las partículas de activación lentiviral Tropomyosin γ (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Tpm3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Tropomyosin γ (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Tpm3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Tropomyosin γ. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Tpm3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.