Tropomyosin β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423482

Descripción general

Tpm2 codifica la tropomiosina β, una proteína de tipo coiled-coil que se une a la actina y polimeriza a lo largo de la F-actina para estabilizar los filamentos delgados y regular el acceso de los motores de miosina y de factores asociados a la actina. En células musculares y no musculares, las isoformas de tropomiosina contribuyen a la contractilidad, la tensión del citoesqueleto, la forma celular y la mecanotransducción al ajustar la dinámica de los filamentos de actina dentro de fibras de estrés y estructuras sarcoméricas. A través de su función en la organización actomiosínica, TPM2 influye en procesos como la migración celular, la remodelación de adhesiones y la generación de fuerza, que se conectan con vías del citoesqueleto dependientes de las GTPasas Rho. La desregulación de la composición de tropomiosina y del control de los filamentos de actina es relevante para trastornos de la estructura y función muscular, así como para fenotipos impulsados por el citoesqueleto estudiados en modelos de desarrollo y de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin β (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tpm2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tpm2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tpm2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Tropomyosin β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tpm2 para la investigación de la señalización de Tropomyosin β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tpm2 críticos para la función de Tropomyosin β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tpm2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Tropomyosin β CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Tropomyosin β CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tpm2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Tropomyosin β (m) y el plásmido HDR Tropomyosin β (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tpm2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tpm2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.