Plásmido CRISPR de Activación (h) Tropomyosin β: sc-401580-ACT

TPM2 codifica la tropomiosina beta humana, una proteína de tipo coiled-coil que se une a la actina y se polimeriza a lo largo de la actina filamentosa para regular la estabilidad de los filamentos finos y el acceso de los motores de miosina a la actina. Al modular la contractilidad actomiosínica, la tropomiosina beta contribuye a la organización del citoesqueleto, a la dinámica de los sarcómeros y de las fibras de estrés, y a vías que regulan la forma celular, la migración y la mecanotransducción. La expresión de TPM2 y el equilibrio entre sus isoformas influyen en la especialización de los filamentos de actina en músculo y en tejidos no musculares, vinculándola a procesos como la miofibrilogénesis y la remodelación del citoesqueleto. Las alteraciones genéticas en TPM2 se han asociado con miopatías congénitas y fenotipos de contractura, lo que la convierte en una diana relevante para estudiar la regulación de los filamentos de actina en modelos celulares pertinentes para la enfermedad.

Tropomyosin β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TPM2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tropomyosin β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TPM2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TPM2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tropomyosin β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TPM2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tropomyosin β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tropomyosin β en células tumorales con expresión de TPM2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.