Tropomyosin α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423481

Descripción general

El gen Tpm1 de ratón codifica la tropomiosina α, una proteína de tipo coiled-coil que se une a la actina y estabiliza la actina filamentosa, además de determinar la función actomiosina al regular el acceso de la miosina a la actina. La tropomiosina α contribuye a la arquitectura del citoesqueleto, a la formación de fibras de estrés y a las dinámicas contráctiles que moldean la adhesión celular, la migración y la mecanotransducción. A través de su papel en la organización de los filamentos de actina, TPM1 se integra con vías que controlan la remodelación de la actina sarcomérica y no muscular, incluida la regulación del citoesqueleto dependiente de las GTPasas Rho. Las alteraciones en el equilibrio de isoformas de tropomiosina y la regulación de la actina dependiente de TPM1 se han asociado con defectos en la función muscular y con una desregulación más amplia del citoesqueleto, relevante para modelos de cardiomiopatía y de motilidad de células tumorales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin α (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tpm1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tpm1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tpm1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Tropomyosin α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tpm1 para la investigación de la señalización de Tropomyosin α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tpm1 críticos para la función de Tropomyosin α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tpm1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Tropomyosin α CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Tropomyosin α CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tpm1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Tropomyosin α (m) y el plásmido HDR Tropomyosin α (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tpm1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tpm1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.