Plásmido CRISPR de Activación (h) Tropomyosin α: sc-401266-ACT

TPM1 codifica la tropomiosina alfa humana, una proteína de tipo coiled-coil que se une a la actina y que estabiliza la actina filamentosa y regula el acceso de la miosina a la actina en el músculo estriado y liso, así como en redes citoesqueléticas no musculares. Mediante su incorporación específica por isoforma en los filamentos delgados, TPM1 contribuye a controlar la contractilidad, la forma celular, la adhesión y la migración, integrándose con la dinámica actomiosínica y las vías de mecanotransducción. La alteración de la expresión de TPM1 o del equilibrio entre isoformas se ha asociado con cardiomiopatías y con fenotipos de remodelación del citoesqueleto relevantes para la disfunción muscular y la motilidad de células cancerosas. Estas propiedades convierten a TPM1 en un nodo útil para estudiar la organización del sarcómero, el ensamblaje de fibras de estrés y las respuestas de señalización dependientes de actina.

Tropomyosin α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TPM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tropomyosin α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TPM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TPM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tropomyosin α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TPM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tropomyosin α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tropomyosin α en células tumorales con expresión de TPM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.