tropomodulin 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423427

Descripción general

El gen Tmod1 de ratón codifica la tropomodulina 1, una proteína que tapa el extremo puntiagudo de los filamentos de actina y que coopera con la tropomiosina para estabilizar los filamentos y definir su longitud en redes citoesqueléticas diferenciadas. Al limitar el intercambio de subunidades de actina en los extremos puntiagudos, Tmod1 contribuye a la organización de las miofibrillas, a la arquitectura de actina asociada a la membrana y a la remodelación celular dependiente de la tensión. Estas funciones sitúan a Tmod1 en vías que regulan la dinámica del citoesqueleto de actina, el ensamblaje del sarcómero y el control de la forma celular. La regulación alterada de la estabilidad de los filamentos de actina es ampliamente relevante para estudios de la estructura muscular y la disfunción contráctil, así como para las contribuciones del citoesqueleto a la motilidad celular y la mecanobiología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO tropomodulin 1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tmod1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tmod1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tmod1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína tropomodulin 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tmod1 para la investigación de la señalización de tropomodulin 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tmod1 críticos para la función de tropomodulin 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tmod1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido tropomodulin 1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido tropomodulin 1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tmod1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR tropomodulin 1 (m) y el plásmido HDR tropomodulin 1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tmod1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tmod1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.